基于CRISPR-Cas9對鼠感光細胞進行RP9基因敲除和突變研究RP病變分子機制

Targeted RP9 ablation and mutagenesis in mouse photoreceptor cells by CRISPR-Cas9.

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  • PMID:28216641
  • 雜志:Scientific reports
  • 影響因子:5.578

 

研究背景:

真核細胞中前體mRNA(Pre-mRNA)的剪接是一種重要的生物過程。已有研究表明,許多剪接體基因的突變會引起人類眼疾。RP9pre-mRNA剪接因子)的突變,易導致常染色體顯性視網膜色素病變(adRP),并伴有早發和嚴重視力喪失。但是,RP9突變引起感光細胞退化的分子機制尚不明確。

 

研究目的:

文章通過CRISPR/Cas9系統對RP9敲除和點突變(Rp9, c.A386T, P.H129L),與報道過的色素性視網膜炎感光細胞661 W(RP9, c.A410T, P.H137L)相類似。研究結果發現,突變型細胞的增殖和侵襲能力明顯下降,并結合RNA-seq數據,RP(色素性視網膜炎)相關基因Fscn2 Bbs2在突變型細胞中出現下調。并且,Fscn2 前體mRNA剪接受到顯著影響。文章結果揭示了RP9和疾病特異性基因之間的功能性關系,提供了一種與RP9相關的色素性視網膜炎發病機制的新觀點。

 

材料方法:

研究材料:

百度可以买彩票鼠源661W(錐生細胞系)–Cas9/sgRNA轉染,Rp9-KIRp9-KO,以及對照661W

 

測序方法:

轉錄組測序Illumina HiSeq 2500,3個樣本:KI 、KO、對照

 

技術路線:

 

實驗結果:

1. 661W視錐細胞驗證—-免疫組化染色

為鑒定661W細胞是視錐細胞還是視桿細胞,進行免疫染色,結果呈現陽性,表明細胞是視錐細胞起源的。


/綠視蛋白(A)藍視蛋白(B)錐蛋白(C)視紫紅質(D